Dean Winchester (Jensen Ackles) – Irmão mais velho de Sam Winchester e filho de John e Mary Winchester. Quando com 4 anos de idade, perdeu a mãe num incêncio demoniaco e seu pai desapareceu depois do fato. Conheceu várias criaturas e demônios durante suas caçadas, e ao final da primeira temporada encontra seu pai desaparecido que na segunda, deu sua vida e o colt pela vida do Dean.
Samuel “Sam” Winchester (Jared Padalecki) – Irmão mais novo de Dean, quando pequeno foi amaldiçoado por um demônio chamado Azazel, onde aos 22 anos de idade seria o chefe do exército do inferno e receptáculo de Lúcifer. Na quinta temporada, Lúcifer toma seu corpo porém é morto (junto com Sam), por Dean.
John Winchester (Jeffrey Dean Morgan) – É o pais dos irmãos Winchester e marido de Mary. John vem de uma família de classe baixa e era mecânico. Após ver sua esposa morrer queimada no teto do quarto de Sam, ele resolve ir a caça do culpado e proteger os filhos. John teve um caso fora do casamento com Mary, e desse caso nasceu seu terceiro filho, Adam.
Mary Winchester (Samantha Smith) – Mãe dos irmãos Winchester, vem de uma família de caçadores sobrenaturais. Quando jovem, foi obrigada a fazer um pacto com Azazel em troca da vida de John, mas o resultado desse pacto só ocorreria em 10 anos, onde seu segundo filho, Sam, seria amaldiçoado por ele.
Jessica Moore (Adrianne Palicki) – Namorada de Sam, o conheceu no colegial e pretendiam ter um futuro juntos. Porém ela estava atrapalhado os planos de Azazel, e ele resolvel colocar um fim nela dando o mesmo destino dado para a mãe dos irmãos Winchester. Depois disso, Sam de uma vez por todas resolve ir atrás dos culpados e vingar a morte de Jess e Mary.
Robert “Bobby” Singer (Jim Beaver) – Grande amigo da família Winchester, um caçador profissional que ajuda os irmão sempre que precisam. Construiu seu próprio quarto do pânico anti-demônios, para um eventul apocalipse. Na quinta temporada por causa de um terrível fato, ele acaba ficando paraplégico e pausou as caçadas por esse motivo.
Ellen Harvelle (Samantha Ferris) – Mãe de Jo e uma super caçadora e dona do Bar da Estrada. Perdeu seu marido a alguns anos durante uma caçada frustrada dele com John Winchester. Ellen e sua filha dão a vida pelo mundo ao se explodirem num galpão para destruir cães do inferno.
Jo Harvelle (Alona Tal) – Filha de Ellen e uma bela garota. Na quinta temporada após levar um tiro e morrer por causa do mesmo, é destruída com sua mãe ao se explodirem para ajudar Sam e Dean.
Ash (Chad Lindberg) – Um cara muito louco porém muito experiente em detectar presenças paranormais, morreu em uma das temporadas ao ter o Bar da Estrada queimado, porém reaparece na quinta como um espirito no céu.
Azazel (Fredric Lehne) – O primeiro grande demônio a aparecer na série. Servo de Lúcifer, amaldiçoa Sam quando pequeno para que no fururo ele seja o receptáculo de seu mestre. É o causador da abertura da porta do inferno e a libertação de muitos demônios, porém no mesmo episódio ele é morto por Dean Winchester.
Castiel (Misha Collins) – Primeiro anjo a aparecer na série. É o melhor amigo dos irmãos Winchesters, e apesar de não ser do seu feitio, ele fura muitas regras do céu para ajudar os irmão. Sua função primária era de fazer Sam destruir Lilith e promover o apocalípse, porém fez ao contrário e ajudou os irmãos, mas não conseguiu impedir o fato.
Ruby (Katie Cassidy/Genevieve Cortese) – Demônia de confinça de Sam. Dean sempre duvidou ela e sempre quis a matar, porem por respeito a seu irmão nunca o fez. Ruby é quem promoveu o acontecimento do apocalipse, pois ela foi quem indiretamente fez Sam libertar Lúcifer.
Bela Talbot (Laura Cohan) – Linda garota, porém uma grande ladra de relíquias. Conhece os irmãos no episódio em que um pé de coelho é furtado do galpão de itens de John Winchester. Ela morre na terceira temporada após terminar um pacto que ela havia feito a dez anos atrás.
Anna (Julie McNiven) – Anjo que chegou para tentar impedir o apocalipse, então mais tarde ela descobre que se Sam não tivesse nascido o apocalipse nunca aconteceria. Por conta disso ela resolve voltar no tempo e matar Mary Winchester, porém sua missão é frustrada e o Arcanjo Miguel a mata.
Lucifer (Mark Pellegrino/Jared Padalecki) – Anjo do mal, causador do apocalipse. Surgiu após a quebra do 66º selo. Seu receptáculo original é Sam Winchester, e na quinta temporada o mesmo aceita Lúcifer porém ambos são mortos no fim da mesma temporada.
Miguel (Matt Cohen/Jake Abel) – Arcanjo poderoso o único que pode matar Lúcifer, mas isso acarretaria na destruição do mundo. No fim da quinta temporada ele e Lucifer são destruídos por Dean.
Meg Masters (Nicki Aycox/Rachel Miner) – Primeira demônia a aparecer na série, porém logo é descoberta pelos irmãos enquanto invoca Daevas. Na primeira temporada ela é morta, porém mais tarde ela ressurge em outro corpo.
Victor Henricksen (Charles Malik Whitfield) - Agente especial do FBI encarregado da captura dos irmãos Wincester. Ele nunca acreditou na versão dos irmãos e eles sempre escapavam quando eram presos. No episódio “Terror na Delegacia”, finalmente ele acredita nos irmãos, mas infelizmente ele é destruído por Lilith.
Pamela Barnes (Traci Dinwiddie) - Mulher linda e a melhor vidente. Amiga de Bobby, ajudou os três (Bobby e os irmãos), muitas vezes. Porém na quarta temporada algo fatal acontece, ele perde a visão ao tentar visualizar Castiel e mais tarde é morta por um demônio.
Chuck Shurley “Carver Edlund” (Rob Benedict) - Profeta do apocalipse, é ele quem escreve a vida dos irmãos Winchester e sabe tudo o que irá acontecer. Resolve parar de escrever na quinta temporada, na parte onde Dean vai para o inferno (equivalente a terceira).
Adam Milligan (Jake Abel) - Filho de John Winchester, fruto de um caso fora do casamento. É morto em seu primeiro aparecimento por um Ghol que toma sua forma. Mais tarde ele renasce e descobre que é receptáculo de Miguel e o acaba aceitando.
Brincalhão/Gabriel ( Richard Speight, Jr.) - Um anjo muito maluco que coloca os irmãos em diversas enrascadas, mais tarde assume que é o Arcanjo Gabiel. Antes de sua morte no episódio “Martelo dos Deuses”, ele grava um video explicando para Sam e Dean de como matar Lúcifer, e essa outra forma era unindo os anéis dos cavaleiros apocalípticos abrindo a porta do inferno e jogando Lúcifer.
Alastair ( Mark Rolston/Christopher Heyerdahl) - Demônio poderoso e que tem o propósito de indiretamente, preparar Sam e Dean para receber seus respectivos anjos. Ele é morto por Sam na quarta temporada.
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